外泌體是什么？
外泌體（Exosome），是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-200 nm。外泌體存在于體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，不同組織來源的外泌體在內(nèi)容物組成和功能方面存在差異，這種差異受到細(xì)胞外基質(zhì)和微環(huán)境的動態(tài)調(diào)控。越來越多的證據(jù)表明，宿主細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體參與了腫瘤發(fā)生、生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預(yù)后分析。
外泌體都有哪些分離提取方法？
對于外泌體研究，分離和收集外泌體是非常關(guān)鍵的一步。目前對于外泌體收集有：超高速離心、密度梯度離心、磁珠免疫、超濾法、聚合物沉淀等幾種主要方法，各種方法均存在不同優(yōu)缺點。
但是嘞，大牛們的 CNS文章大多用的都是超速離心的方法，不信你看：
怎么知道提取的外泌體合不合格？
鑒定外泌體提取合格與否有三大法寶：電鏡、NTA粒徑、Western blot檢測
目前外泌體的分離提取還沒有到達(dá)爐火純青的地步，幾乎沒有任何一個單一實驗可以確定外泌體的存在。所以提取的外泌體需要通過三大法寶來相互佐證：形態(tài)學(xué)鑒定（電子顯微鏡技術(shù)）、NTA粒徑分析以及Western blot檢測標(biāo)志蛋白（常用的有CD9、CD63、CD81、TSG101、HSP70等）。電鏡可以觀察樣品中是否有與外泌體相似的經(jīng)典結(jié)構(gòu)，有經(jīng)典結(jié)構(gòu)說明樣品中有外泌體或者與外泌體類似的，如溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等結(jié)構(gòu)。WB檢測發(fā)現(xiàn)樣品中具有外泌體的標(biāo)志物，可以一定程度上排除溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等情況，但依舊不知道樣品的整體情況。因為電鏡和WB的連用只能證明樣品中有外泌體，但是有多少、純度等就不得而知了。所以這個時候需要再來一個NTA實驗，NTA粒徑分析可以反應(yīng)外泌體樣品中粒子的群體特征，以達(dá)到跟電鏡和WB相輔相成的作用。
外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究，有啥好期待的嘞：
外泌體可通過傳遞信息影響靶細(xì)胞的功能，激活細(xì)胞信號通路，在免疫、凝血、腫瘤等生理病理過程中發(fā)揮作用。而其中蛋白質(zhì)的差異表達(dá)是區(qū)分不同來源外泌體的重要特點，是研究外泌體起源的重要途徑。蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)逐漸成為研究各種亞細(xì)胞組分蛋白質(zhì)組的重要工具。針對外泌體進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，可以揭示疾病發(fā)病機(jī)制、尋找疾病診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物、篩選疾病治療靶點等。
廢話少說，我們來看看人家具體是怎么運用的吧：
研究目的
鼻咽癌（NPC）是鼻咽上皮常見的惡性腫瘤，在東南亞地區(qū)高發(fā)，在我國的廣東，廣西兩省尤為普遍。NPC具有高轉(zhuǎn)移率，> 60％的鼻咽癌患者出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)浸潤，5％8％的患者出現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。但是NPC轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍有待闡明。本研究的目的是為了闡明NPC來源的外泌體在腫瘤血管生成中的作用。
實驗流程
實驗小結(jié)
作者利用超速離心法從NPC細(xì)胞系C666-1和非腫瘤性NP細(xì)胞系（NP69和NP460）培養(yǎng)基中分離外泌體并采用了不同的驗證方法來確保外泌體的質(zhì)量。結(jié)果表明，在C666-1外泌體的誘導(dǎo)下，受體內(nèi)皮細(xì)胞在體外顯著表達(dá)血管生成表型。結(jié)合iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法以及共聚焦顯微鏡和Western blot等分析，作者證實了外泌體將血管生成蛋白從NPC轉(zhuǎn)移到受體內(nèi)皮細(xì)胞。表明NPC分泌的外泌體可以在體外誘導(dǎo)血管生成，血管生成蛋白在鼻咽癌細(xì)胞分泌的外泌體誘導(dǎo)腫瘤血管生成過程中具有關(guān)鍵作用，可作為潛在的治療靶標(biāo)。
外泌體在免疫中抗原呈遞、腫瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。金開瑞可提供外泌體研究整體方案設(shè)計、外泌體提取/粒徑測量/電鏡檢測、外泌體蛋白組/轉(zhuǎn)錄組，助力您的外泌體相關(guān)研究。
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