2020年10月22日，泛生子（納斯達克代碼：GTH）宣布與杭州艾沐蒽生物科技有限公司（以下簡稱“艾沐蒽”）簽訂獨家許可協(xié)議，獲得其血液腫瘤微小殘留?。⊿eq-MRD）產(chǎn)品的全球獨家許可，并將加速產(chǎn)品開發(fā)和商業(yè)化。根據(jù)協(xié)議，泛生子將擁有使用艾沐蒽的Seq-MRD®技術(shù)進行研發(fā)、注冊、商業(yè)化血癌MRD檢測產(chǎn)品的專有權(quán)。

       一、血液腫瘤發(fā)病背景簡介

       血液腫瘤是一類常見但復雜的癌癥類型的統(tǒng)稱，主要包括各類白血病、多發(fā)性骨髓瘤以及惡性淋巴瘤，是一類具有高度異質(zhì)性的疾病，對患者及其家庭都有巨大影響。以骨髓瘤為例，通過誘導化療等治療方案，可使得大約80%的成人患者達到臨床緩解。在這其中依然會有約72%的患者出現(xiàn)因免疫逃逸從而導致的疾病復發(fā)，骨髓移植后10-15年的生存率也僅保持在15%左右[1]。急性淋巴細胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia, ALL）是成人最常見的急性白血病類型，根據(jù)現(xiàn)行的系統(tǒng)性誘導化療方案，有85~90%的患者會出現(xiàn)臨床緩解，但這部分患者仍會存在60~70%的復發(fā)[2]。相比于兒童急性淋巴細胞白血病90%的存活率，成人急性淋巴細胞白血病的預后并不能令人滿意[3]。

       二、MRD在淋系血液腫瘤臨床診療中的應用

       微小殘留病變（Minimal Residue Disease，MRD）是指患者在接受治療后處于臨床緩解期，無臨床癥狀但在體內(nèi)仍然存在腫瘤細胞的狀態(tài)。MRD狀態(tài)在實際中被用于指導治療[4]，根據(jù)是否適合骨髓移植[5]和預測復發(fā)情況[6]對患者進行危險度分層。它還可用于指導臨床研究中的治療決策[7,8]。一項關(guān)于急淋白血?。ˋLL）的研究顯示，MRD陰性與無復發(fā)生存期延長4倍，總生存期延長3倍具有顯著相關(guān)性[6]。加州大學舊金山分校的醫(yī)學博士Aaron Logon呼吁必須將治療轉(zhuǎn)向針對MRD的靶向和消除。MRD陽性亦被美國FDA認可為具有臨床指導意義的指標，基于一項涉及706名成人多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者國際研究結(jié)果，美國FDA最近批準了針對MM患者一線治療的CD38靶向單克隆抗體療法[9]。評估患者接受此治療前和治療后多個時間點的MRD水平，發(fā)現(xiàn) MRD陰性與顯著延長的無進展生存期相關(guān)[10]。血液惡性腫瘤的臨床實踐指南指出，MRD狀態(tài)是臨床結(jié)果和對治療反應的可靠指標，并且臨床結(jié)果與診斷為ALL和MM患者經(jīng)clonoSEQ Assay測量的MRD水平密切相關(guān)。在多發(fā)性骨髓瘤美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南[11]，IMWG共識標準和ESMO骨髓瘤臨床實踐指南[12]中建議在每個治療階段后使用經(jīng)過驗證的分析方法進行MRD評估；急淋白血病NCCN指南建議在完成初始誘導后對ALL成人患者進行MRD檢測，MRD檢測的其他時間點應遵循所使用的治療方案。NCCN指南還建議使用MRD檢測來確定第一次或第二次完全緩解但MRD陽性的患者，應使用blinatumomab治療[13]。

       一項Meta數(shù)據(jù)分析研究了14項已發(fā)表的研究成果，其中包括1273名MM患者，并量化了生存結(jié)果與MRD狀態(tài)之間的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)MRD陰性與無進展生存期和總生存期相關(guān)。MRD檢測的預后價值的證據(jù)適用于所有疾病亞型、年齡、治療方案、檢測的治療階段和MRD檢測方法。MRD陰性與中位無進展生存期（PFS）相關(guān)，MRD陰性患者的PFS（54個月）超過MRD陽性患者（26個月）兩倍時間[14]。

       三、MRD檢測技術(shù)方法對比

       MRD是在分子水平上對疾病狀態(tài)進行檢測。在此之前，對血液腫瘤的復發(fā)檢測歷經(jīng)了傳統(tǒng)的形態(tài)學評估、流式細胞術(shù)、影像學評估以及分子生物學評估等階段。無論采用何種方式，在患者接受治療的過程中，都需要對患者的血液或骨髓樣本進行檢測，了解其中腫瘤細胞的存在數(shù)量以及類型。能夠識別出遠低于5%原始細胞閾值的殘留病變，是提高風險分類與預后的關(guān)鍵要素。在這樣狀態(tài)下殘存的腫瘤細胞數(shù)量很少，且沒有臨床癥狀，所以不易察覺，但腫瘤的復發(fā)也往往源于此，因此才需要有更加準確和靈敏的方法對MRD進行檢測，從而獲知治療的效果和復發(fā)可能性。

       形態(tài)學評估是應用時間最長的評估方式，已經(jīng)沿用了一個多世紀，但其靈敏度只能維持在約5%，即在每20個細胞中檢出1個白血病細胞[15]。起步于上世紀80年代的流式細胞術(shù)，大幅度的提高了MRD的檢測靈敏度。例如，通過使用熒光標記對多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的細胞進行表面標記，使其能夠被激光照射時得以被記錄而獲知其所占比例，與顯微鏡計數(shù)相比，流式細胞術(shù)的靈敏度可以提高到10-4~-5之間，即可在10,000-100,000個細胞中檢測到1個骨髓瘤細胞[16]，但受限于流式細胞儀的激光波長種類和可選的熒光標記，樣本的新鮮程度，以及操作人員經(jīng)驗與細胞類型評價也具有較強的主觀性，使得其并不容易形成統(tǒng)一的臨床檢測標準。PET-CT是近年來新型的影像學診斷技術(shù)，其也可應用于骨髓瘤等血液腫瘤的影像學評估，并已被NCCN所接受[17]，但該技術(shù)的應用仍然面臨著靈敏度低，對身體有輻射性且價格昂貴等問題，無法成為臨床上廣泛應用的監(jiān)測方法。隨著分子生物學實驗技術(shù)的快速發(fā)展，其應用也逐漸擴展到了血液腫瘤相關(guān)領(lǐng)域。熒光定量實時PCR技術(shù)的不斷完善，使得其已經(jīng)在上世紀末被逐漸應用于MRD的檢測。根據(jù)其實驗原理，采用PCR技術(shù)的MRD檢測靈敏度可以達到10-5~-6，可在10-100萬個細胞中檢測到1個骨髓瘤細胞[18]。但PCR技術(shù)只能檢測已知的序列突變，不能對未知的基因重組進行檢測和定量白血病細胞的數(shù)量和來源，使其臨床應用也受到很大的局限。

       隨著基因測序技術(shù)的不斷迭代，目前的二代測序技術(shù)（NGS）已經(jīng)可以用來對眾多腫瘤標志物panel進行高通量檢測，其應用也逐步拓展到血液腫瘤。淋系白血病指的由淋巴系統(tǒng)細胞（主要為B細胞和T細胞）克隆性增殖導致的癌癥，因此可以通過對TCR和BCR測序特異性識別癌細胞。人體中的T細胞受體（TCR）是T細胞特異性識別和結(jié)合抗原肽MHC的分子結(jié)構(gòu)。在組成TCR的α、β、γ、δ肽鏈中，β鏈中互補決定區(qū)3的多樣性使得T細胞能夠識別各種各樣的抗原。而這樣的多樣性是通過體細胞V（D）J基因重排產(chǎn)生的。由于V，D，J基因片段本身就具有多樣性，在重組過程中，在V-D和D-J的連接去還經(jīng)常有核苷酸隨機插入與缺失，這就進一步增加了肽鏈的多樣性，TCR的總多樣性可高達1015，而在任一個人體內(nèi)的多樣性通常為5000萬種。B細胞受體（BCR）是由兩條重鏈（H）和兩條輕鏈（κ和λ）組成的四聚體，其中重鏈分為可變區(qū)（V區(qū)）、恒定區(qū)（C區(qū)）、跨膜區(qū)及胞質(zhì)區(qū)；輕鏈則只有V區(qū)和C區(qū)。V區(qū)由3個互補決定區(qū)（CDR1、CDR2和CDR3）組成，CDR的基因組成和排列順序呈現(xiàn)高度多樣性，在同一個體內(nèi)，這種多樣性可高達109~12，從而構(gòu)成容量巨大的BCR庫。對于血液腫瘤而言，NGS的優(yōu)勢正好可以匹配免疫系統(tǒng)中數(shù)百萬甚至數(shù)億計各自不同的B/T細胞受體基因，從而對MRD進行更加準確的定量[19]。NGS對于MRD的靈敏度一直保持在10-6左右，這使得可以對某些特征性的腫瘤細胞進行靶向跟蹤，考慮到NGS技術(shù)的不斷平臺化，其檢測結(jié)果的穩(wěn)定性也將大幅提高[20]。在2017/2018版《NCCN急性淋巴細胞白血病臨床實踐指南》、2017版《NCCN多發(fā)性骨髓瘤臨床實踐指南、》2016年版《中國成人急性淋巴細胞白血病診斷與治療指南》和2017年版《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南》中均推薦可使用NGS進行MRD檢測方法。

       四、美國MRD已獲批產(chǎn)品情況介紹

       2018年9月28日，F(xiàn)DA通過de novo 審批通道授予clonoSEQ 檢測和商業(yè)化許可，clonoSEQ 可使用骨髓樣本中的DNA檢測和監(jiān)測多發(fā)性骨髓瘤（MM）和B細胞急性淋巴細胞性白血病（ALL）患者的最小殘留疾?。∕RD）。ClonoSEQ 對血液中的MRD（微小殘留白血?。O敏感，可以檢測到低每一百萬個細胞中至1癌個細胞的水平。

       ClonoSEQ是第一個也是唯一一個FDA授權(quán)的用于MRD檢測的體外診斷測方法。同時也是第一個通過免疫測序技術(shù)獲得批準的臨床診斷工具。該檢測方法可對MRD進行標準化、準確和靈敏的測量，從而使醫(yī)生能夠預測患者的預后，評估隨時間推移對治療的反應，在緩解期間監(jiān)測患者情況并檢測潛在復發(fā)可能。

       FDA對三項之前進行的臨床研究（一項273例急性淋巴細胞白血病，一項正在進行的323例多發(fā)性骨髓瘤和一項706例多發(fā)性骨髓瘤）所得樣本進行了回顧性分析評估，認可了該檢測的臨床有效性。對急性淋巴細胞白血病患者而言，clonoSEQ可用來評估在不同疾病負擔閾值下的MRD水平，從而顯示MRD水平與無事件生存相關(guān)---即患者在治療后沒有發(fā)生某些并發(fā)癥或事件的時間長度。clonoSEQ檢測結(jié)果為MRD陰性患者的無事件生存率較長，而MRD檢測結(jié)果較高的患者無事件生存率較低。對多發(fā)性骨髓瘤患者而言，clonoSEQ檢測給出了無進展生存時間與無疾病生存時間之間的相似關(guān)聯(lián)性。

       ClonoSEQ產(chǎn)品的成功，歸因于Adaptive公司的專有免疫測序平臺所積累的用于鑒定和定量惡性細胞的特定DNA序列的數(shù)據(jù)庫，以及檢測結(jié)果與臨床結(jié)果的關(guān)聯(lián)性的驗證。

       五、Seq-MRD®未來臨床應用潛力巨大

       中國血液腫瘤MRD的潛在市場非常廣闊，僅2017年，新增確診的淋系血液腫瘤患者約為13.5萬人，其中NHL患者超過8萬例，ALL和CLL患者約3.5萬例， MM患者約2萬例。假設(shè)新發(fā)患者平均每年檢測4次，每次價格3000元人民幣，則潛在市場規(guī)模將達16億人民幣。而存量患者的潛在市場則更大，據(jù)悉，淋系血液腫瘤存量患者人數(shù)為新增患者的2-4倍[22]。假設(shè)存量患者平均每年檢測2次，潛在市場規(guī)?？筛哌_16-32億人民幣。Seq-MRD有望成為這些患者的標準MRD檢測。

       泛生子與艾沐蒽此次合作推出的Seq-MRD®是基于二代高通量測序技術(shù)(NGS)，目前國內(nèi)自主開發(fā)的唯一一款血液腫瘤微小殘留病(MRD)檢測產(chǎn)品，靈敏性可達10-6，相比傳統(tǒng)的MRD檢測方法，Seq-MRD®檢測靈敏度提高10-100倍。在過去幾年中，Seq-MRD®已經(jīng)在國內(nèi)完成數(shù)千例臨床樣本的驗證。Seq-MRD®可適用于對血液腫瘤，如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等殘留腫瘤細胞的識別、評估與監(jiān)控。輔助臨床醫(yī)生預測長期療效、評估治療效果、監(jiān)測緩解狀態(tài)以及檢測早期復發(fā)，從而為患者量身定制精準化的治療方案，以實現(xiàn)全階段癌癥管理，提高患者臨床療效并降低醫(yī)療成本。

       泛生子是中國的癌癥精準醫(yī)療公司，專注于癌癥基因組學研究和應用，并致力于依托先進的分子生物學及大數(shù)據(jù)分析能力改變癌癥診療方式。致力于提供多應用場景的一站式分子診斷解決方案，包括癌癥早期篩查、診斷與監(jiān)測以及藥物研發(fā)服務(wù)。

       艾沐蒽是中國適應性免疫系統(tǒng)研究前沿的生物科技公司，自主研發(fā)的免疫分析醫(yī)學平臺可揭示和翻譯適應性免疫系統(tǒng)的遺傳密碼，并致力于將其測序技術(shù)應用于癌癥、自身免疫性疾病、傳染性疾病等免疫介導性疾病的診斷和治療中。

       本次戰(zhàn)略整合將進一步擴展泛生子在腫瘤診斷和監(jiān)測領(lǐng)域的產(chǎn)品規(guī)劃與布局，實現(xiàn)臨床腫瘤患者不同檢測需求的全覆蓋，充分利用泛生子在精準醫(yī)學分子診斷領(lǐng)域的研發(fā)、注冊和商業(yè)化的優(yōu)勢，結(jié)合艾沐蒽的既往血癌產(chǎn)品及數(shù)據(jù)積累的優(yōu)勢。Seq-MRD®檢測產(chǎn)品能夠為目前血液腫瘤的患者提供更加精細化的臨床診斷和治療管理。據(jù)悉，泛生子計劃推動Seq-MRD®檢測產(chǎn)品的注冊申報工作，獲批后將會為血液腫瘤患者提供更加精細化的臨床診斷和治療管理，使患者更快的從技術(shù)創(chuàng)新中獲益。

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