引言：雙特異性抗體（bispecific antibodies, bsAbs）是一類能夠同時靶向兩個不同抗原表位的治療性抗體。相較于傳統(tǒng)單克隆抗體（mAb），bsAbs在腫瘤免疫治療、自身免疫性疾病和感染性疾病中展現(xiàn)出更高的特異性和更低的副作用風險。截至2025年，全球已有14款bsAb藥物獲批上市，另有數(shù)百種處于臨床前研究階段。然而，bsAb的復雜結構（圖1）使其下游純化面臨巨大挑戰(zhàn)：
本文將系統(tǒng)解析bsAb純化的核心策略，涵蓋捕獲層析、雜質(zhì)去除技術及未來發(fā)展方向，為生物制藥工藝開發(fā)提供全面指導。
圖1 | 雙特異性抗體的結構分類：對稱型與非對稱型、IgG樣與非IgG樣結構。
一、捕獲層析：從Protein A到新型技術
1.1 傳統(tǒng)親和層析：Protein A的黃金標準
Protein A親和層析是bsAb捕獲的核心技術，其通過結合抗體的Fc區(qū)域?qū)崿F(xiàn)高特異性捕獲。近年來，高載量樹脂（如MabSelect PrismA）的研發(fā)顯著提升了效率：
局限性：
1.2 非Fc依賴型捕獲技術
對于缺乏Fc區(qū)域的非IgG樣bsAb，需采用輕鏈（LC）靶向親和層析：
1.3 混合模式層析：新一代捕獲方案
混合模式層析結合離子交換、疏水作用等多機制，展現(xiàn)出獨特優(yōu)勢：
創(chuàng)新應用：
圖2 | 典型下游純化流程：捕獲、低pH病毒滅活、精純、病毒過濾等步驟。
二、產(chǎn)物相關雜質(zhì)去除策略
2.1 同源二聚體：結構錯配的克星
2.1.1 親和層析差異化捕獲
2.1.2 離子交換層析電荷調(diào)控
2.1.3 混合模式層析多維分離
圖3 | 不同親和層析配體的結合位點：Protein A（Fc）、MabSelect PrismA（Fc+VH3）、KappaSelect（κ輕鏈）等。
2.2 片段雜質(zhì)：從半抗體到單臂片段
2.2.1 親和層析精準去除
2.2.2 混合模式層析高效精純
2.3 聚集體：免疫原性的隱形殺手
2.3.1 親和層析洗脫優(yōu)化
2.3.2 混合模式層析多維清除
圖4 | 產(chǎn)物相關雜質(zhì)類型：同源二聚體、半抗體、聚集體等。
三、工藝相關雜質(zhì)清除技術
3.1 宿主細胞蛋白（HCP）
3.1.1 層析與深度過濾聯(lián)用
3.1.2 上游工藝聯(lián)動
3.2 病毒安全：從滅活到過濾
3.2.1 低pH滅活
3.2.2 層析與膜過濾
3.3 內(nèi)毒素：電荷差異的利用
四、工藝整合與未來展望
4.1 經(jīng)典流程 vs 創(chuàng)新模式
圖7 | （A）經(jīng)典流程；（B）混合模式替代離子交換；（C）混合模式替代Protein A。
4.2 技術前沿：數(shù)字化與連續(xù)生產(chǎn)
五、結語
雙特異性抗體的下游純化是一場特異性與效率的博弈。從Protein A的黃金標準到混合模式層析的創(chuàng)新突破，從同源二聚體的精準分離到病毒安全的全面保障，每一步技術進步都在推動bsAb藥物的臨床轉(zhuǎn)化。未來，隨著AI與連續(xù)生產(chǎn)技術的深度融合，抗體純化將邁向更高純度、更低成本的智能化時代。
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