抗體-藥物偶聯(lián)物（ADCs）通過靶向遞送細(xì)胞毒性藥物革新了腫瘤治療領(lǐng)域。然而，有效載荷多樣性不足和耐藥機(jī)制的出現(xiàn)使研究者不斷探索新的有效載荷模式。分子膠-抗體偶聯(lián)物（MACs）利用分子膠作為有效載荷，代表了該領(lǐng)域的突破性進(jìn)展。通過發(fā)揮分子膠的催化、驅(qū)動(dòng)特性，MACs展現(xiàn)出更高的療效、更低的脫靶效應(yīng)和更優(yōu)的治療指數(shù)。

       本文章探討了MACs的作用機(jī)制、研究進(jìn)展及其超越傳統(tǒng)ADCs和分子膠的潛力，同時(shí)分析了開發(fā)挑戰(zhàn)和未來方向。

       一. 分子膠與ADC的聯(lián)用

       通過利用抗體的腫瘤靶向特異性，ADCs能夠?qū)⒓?xì)胞毒性藥物精準(zhǔn)遞送至惡性組織，從而在最大化治療效果的同時(shí)降低全身毒性。目前已有19款A(yù)DC產(chǎn)品獲批用于20余種臨床適應(yīng)癥。盡管ADC發(fā)展迅猛，也取得很大進(jìn)展，但是當(dāng)前ADC開發(fā)仍受限于有效載荷多樣性不足的問題。已獲批ADC的有效載荷僅涵蓋兩種細(xì)胞毒性機(jī)制：微管抑制和DNA損傷。這一局限凸顯了探索開發(fā)具有新型作用機(jī)制替代有效載荷的迫切需求。

       靶向蛋白降解（TPD）已成為一種革命性的治療策略，其通過小分子誘導(dǎo)效應(yīng)蛋白與靶蛋白接近，從而利用內(nèi)源性蛋白清除機(jī)制實(shí)現(xiàn)選擇性蛋白消除。分子膠是一類單價(jià)小分子（通常分子量<500 Da），通過協(xié)同結(jié)合蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）界面來促進(jìn)兩種蛋白的接近與結(jié)合。在TPD領(lǐng)域，分子膠特指能夠誘導(dǎo)或穩(wěn)定E3泛素連接酶與靶蛋白（底物）相互作用的分子膠降解劑，進(jìn)而引發(fā)靶蛋白的多泛素化和隨后的蛋白酶體降解。值得注意的是，分子膠具有催化性、事件驅(qū)動(dòng)的作用機(jī)制，而分子膠-抗體偶聯(lián)物（MACs）則由此發(fā)展成為一種新一代ADC模式（雙精度靶向及催化機(jī)制）。通過將抗體靶向的精準(zhǔn)性與分子膠的催化機(jī)制相結(jié)合，MACs展現(xiàn)出增強(qiáng)的特異性和改善的抗癌療效潛力（圖1）。

       圖1.分子膠-抗體偶聯(lián)物（MACs）的結(jié)構(gòu)與優(yōu)勢(shì)。該圖展示了分子膠負(fù)載通過連接器與抗體結(jié)合的基本結(jié)構(gòu)。文中列出了傳統(tǒng)抗體-藥物偶聯(lián)物（ADCs）和分子膠的局限性，并強(qiáng)調(diào)了MACs的優(yōu)勢(shì)。簡化結(jié)構(gòu)圖顯示了分子膠負(fù)載通過連接器與抗體結(jié)合的情況。

       2.分子膠降解劑的獨(dú)特功效

       分子膠降解劑通過重編程哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)，誘導(dǎo)致病蛋白的多泛素化和降解。其作用機(jī)制主要體現(xiàn)為：這類小分子可結(jié)合E3泛素連接酶，在其表面形成全新的識(shí)別界面。這種化合物誘導(dǎo)的界面能夠誘導(dǎo)通常不被UPS識(shí)別的底物蛋白(稱為新底物)，進(jìn)而形成E3連接酶-分子膠降解劑-新底物的穩(wěn)定三元復(fù)合物。該復(fù)合物使E3連接酶與新底物空間臨近，從而啟動(dòng)新底物的泛素化修飾及隨后的蛋白酶體降解過程。

       分子膠降解劑因其獨(dú)特的作用機(jī)制，較傳統(tǒng)小分子藥物具有多重優(yōu)勢(shì)。其一，其事件驅(qū)動(dòng)的催化特性使得在低濃度下即可快速起效，且降解劑在完成底物降解后可循環(huán)利用。相較于需要持續(xù)占據(jù)靶點(diǎn)的小分子抑制劑，分子膠降解劑與靶蛋白及E3連接酶間的瞬時(shí)相互作用更能降低耐藥性發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。其二，通過結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與靶標(biāo)結(jié)合的特性，使其較之靶向保守活性位點(diǎn)的傳統(tǒng)小分子藥物具有更高特異性。其三，能夠靶向缺乏小分子結(jié)合口袋或酶活性的蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子），突破傳統(tǒng)藥物"不可成藥"靶點(diǎn)的限制。另一類與分子膠降解劑作用機(jī)制相似的TPD分子是蛋白降解靶向嵌合體(PROTACs)，雖然二者均通過重編程UPS實(shí)現(xiàn)蛋白降解，但存在關(guān)鍵區(qū)別（見圖2）。分子膠降解劑和蛋白酶體靶向嵌合體（PROTACs）是基于泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）的靶向蛋白質(zhì)降解（TPD）技術(shù)的兩種主要形式。分子膠降解劑與PROTACs的主要區(qū)別在于它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)招募機(jī)制。分子膠降解劑通常是小的單價(jià)分子，通過改變蛋白質(zhì)的空間互補(bǔ)性，誘導(dǎo)或穩(wěn)定E3連接酶與目標(biāo)蛋白之間的相互作用。相比之下，PROTACs是由兩個(gè)不同的配體組成的異雙功能分子--一個(gè)與目標(biāo)蛋白結(jié)合，另一個(gè)與E3連接酶結(jié)合--通過一個(gè)靈活的連接器相連，能夠有意地將E3連接酶招募到目標(biāo)蛋白上。形成穩(wěn)定的三元復(fù)合物后，E3連接酶介導(dǎo)泛素分子轉(zhuǎn)移到目標(biāo)蛋白上。隨后形成的多聚泛素鏈作為降解信號(hào)，被26S蛋白酶體識(shí)別。蛋白酶體隨后將標(biāo)記的蛋白質(zhì)降解成小肽片段，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的降解。

       3.分子膠抗體偶聯(lián)物（MACs）：突破ADC與分子膠的局限性

       盡管ADC研發(fā)已取得重大進(jìn)展，但細(xì)胞毒性藥物作為有效載荷仍存在顯著缺陷（圖2）。具體表現(xiàn)為：1）需要高濃度和長時(shí)間暴露才能有效殺傷細(xì)胞；2）釋放后缺乏靶向特異性；3）其毒性遠(yuǎn)強(qiáng)于傳統(tǒng)化療藥物，且主要來源于天然產(chǎn)物，開發(fā)難度大；4）現(xiàn)有細(xì)胞毒性有效載荷種類有限，導(dǎo)致新型差異化載荷稀缺。

       MACs通過整合分子膠和ADC的雙重優(yōu)勢(shì)，成功突破了兩者的局限性（圖2）。其創(chuàng)新性體現(xiàn)在：①抗體介導(dǎo)的精準(zhǔn)遞送：分子膠經(jīng)抗體偶聯(lián)后可精確靶向癌細(xì)胞，顯著提升靶向特異性并降低脫靶效應(yīng)；②藥代動(dòng)力學(xué)優(yōu)化：抗體可增強(qiáng)分子膠的細(xì)胞內(nèi)攝取并延長其半衰期；③治療指數(shù)提升：相較游離分子膠，MACs能以更低系統(tǒng)濃度實(shí)現(xiàn)等效降解活性，從而拓寬治療窗口、改善耐受性并減少副作用；④雙精度靶向：通過協(xié)同分子膠的底物選擇性和抗體的抗原特異性，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的雙重精準(zhǔn)靶向，同時(shí)最大限度降低脫靶效應(yīng)。這些突破性優(yōu)勢(shì)使MACs成為極具前景的新一代治療模式。

       圖2.分子膠降解劑與PROTACs的比較。(A)分子膠降解劑和PROTACs介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解過程。這兩種降解劑都能將特定的E3連接酶與目標(biāo)蛋白（底物或POI)靠近，形成三元復(fù)合體，并依次將泛素分子附著到目標(biāo)蛋白上，最終導(dǎo)致其通過蛋白酶體途徑降解。(B)分子膠降解劑與PROTACs的區(qū)別。

       4.MACs的作用機(jī)制

       MACs的作用機(jī)制在初始單抗介導(dǎo)過程中與傳統(tǒng)ADCs相似，但在細(xì)胞殺傷機(jī)制上存在本質(zhì)差異。其作用流程可分為以下關(guān)鍵步驟（如圖3所示）：

       1）靶向結(jié)合階段

       單克隆抗體特異性識(shí)別癌細(xì)胞表面抗原，通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用完成內(nèi)化。

       2）胞內(nèi)釋放階段

       形成內(nèi)吞體并轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體，溶酶體降解作用釋放分子膠至細(xì)胞質(zhì)。

       3）蛋白降解階段（核心差異點(diǎn)）

       分子膠誘導(dǎo)特定底物與E3泛素連接酶空間接近，形成"E3-分子膠-底物"三元復(fù)合物，通過26S蛋白酶體系統(tǒng)完成底物泛素化修飾及降解。

       4）細(xì)胞死亡效應(yīng)

       靶蛋白的持續(xù)性降解，最終觸發(fā)癌細(xì)胞程序性死亡。

       圖3.MAC的作用機(jī)制。MAC的作用機(jī)制包括幾個(gè)關(guān)鍵步驟：(i)結(jié)合：單克隆抗體（mAb）與腫瘤細(xì)胞表面的抗原（目標(biāo)1）結(jié)合。（ii）內(nèi)化：MAC-抗原復(fù)合物被囊泡包裹，并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。（iii）溶解：MAC-抗原復(fù)合物在溶酶體中被分解。（iv）負(fù)載釋放：分子膠從MAC中釋放，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。(v)三元復(fù)合物形成：分子膠促進(jìn)E3泛素連接酶與底物（目標(biāo)2）之間的相互作用，形成E3連接酶-分子膠-底物復(fù)合物。（vi）泛素化：一旦三元復(fù)合物形成，E3連接酶將泛素分子轉(zhuǎn)移到底物上。（vii）降解：泛素標(biāo)記的底物被26S蛋白酶體識(shí)別并降解為小肽。（viii）分子膠的循環(huán)利用：底物降解后，分子膠被釋放，可以參與進(jìn)一步的泛素化過程，成為催化降解劑。

       機(jī)制優(yōu)勢(shì)：

       相較于傳統(tǒng)ADCs的細(xì)胞毒性殺傷，MACs有以下優(yōu)勢(shì)：

       1）催化性蛋白降解實(shí)現(xiàn)信號(hào)通路阻斷

       2）多輪次降解作用放大藥效

       3）避免化療藥物常見的耐藥機(jī)制

       5.分子膠降解劑-抗體偶聯(lián)物臨床進(jìn)展

       5.1 ORM-5029

       ORM-5029由Orum Therapeutics開發(fā)，是一種首 創(chuàng)新藥分子膠降解劑-抗體偶聯(lián)物，已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。目前，該藥物正在接受針對(duì)HER2陽性晚期實(shí)體瘤患者的I期劑量遞增試驗(yàn)（NCT05511844）的評(píng)估。ORM-5029由三大核心組分構(gòu)成：

       1. 靶向元件：抗HER2抗體帕妥珠單抗（pertuzumab）

       2. 效應(yīng)元件：G1/S期轉(zhuǎn)換蛋白1（GSPT1）分子膠降解劑SMol006

       3. 連接系統(tǒng)：纈氨酸-瓜氨酸（Val-Cit）-PABC可切割型連接子，其DAR為4（圖4）

       圖4.MACs的結(jié)構(gòu)。每個(gè)結(jié)合物中，分子膠以黑色表示，連接子以綠色顯示。粉紅色的液滴帶有細(xì)波線，表示額外的連接子-分子膠分子。

       有效載荷SMol006是通過對(duì)分子膠降解劑CC-885進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化而開發(fā)的。其關(guān)鍵結(jié)構(gòu)改造包括：將3-氯-4-甲基苯基團(tuán)中的甲基替換為2-(2-(甲氨基)乙氧基)乙基。這一結(jié)構(gòu)修飾通過以下方式顯著提升了藥物性能：

       1）溶解性優(yōu)化：引入極性基團(tuán)增強(qiáng)水溶性

       2）分子柔性改善：提高分子構(gòu)象靈活性

       3）偶聯(lián)位點(diǎn)構(gòu)建：為后續(xù)連接化學(xué)提供反應(yīng)位點(diǎn)

       體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ORM-5029在14種HER2陽性乳腺癌細(xì)胞系中均表現(xiàn)出強(qiáng)勁的抗腫瘤活性，其IC50范圍為0.3-14.4 nM。臨床前研究中，該藥物顯示出優(yōu)于現(xiàn)有HER2靶向ADC藥物T-DXd的效力（表現(xiàn)為更低的IC50值）。

       5.2 ORM-6151 (BMS-986497)

       ORM-6151/BMS-986497核心組分構(gòu)成:

       1. 結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

       有效載荷：采用GSPT1降解劑SMol006

       靶向元件：抗CD33單抗

       連接系統(tǒng)：β-葡萄糖醛酸連接子

       偶聯(lián)比：DAR=4（見圖3）

       2. 開發(fā)進(jìn)展

       原研企業(yè)：Orum Therapeutics

       權(quán)益轉(zhuǎn)讓：2023年被百時(shí)美施貴寶（Bristol Myers Squibb, BMS）收購

       商品命名：BMS-986497（BMS研發(fā)代號(hào)）

       3. 臨床開發(fā)里程碑

       2024年獲FDA批準(zhǔn)開展I期臨床試驗(yàn)

       適應(yīng)癥：復(fù)發(fā)/難治性急性髓系白血?。ˋML）或骨髓增生異常綜合征（MDS）

       臨床試驗(yàn)編號(hào)：NCT06419634

       該藥物延續(xù)了SMol006的雙重優(yōu)勢(shì)：

       高效誘導(dǎo)GSPT1蛋白降解和顯著降低對(duì)正常造血干細(xì)胞的毒性。

       5.3 TE-1146

       抗CD38抗體達(dá)雷妥尤單抗和來那度胺均為治療多發(fā)性骨髓瘤（MM）的藥物選擇。然而，MM至今仍無法治愈，幾乎所有患者最終都會(huì)復(fù)發(fā)。為解決這一問題，Immunwork公司開發(fā)了TE-1146，這是一種分子膠降解劑-抗體偶聯(lián)物。

       這種創(chuàng)新療法將重新配置的daratumumab與通過多臂連接子在C末端進(jìn)行位點(diǎn)特異性偶聯(lián)的來那度胺相結(jié)合，DAR為6（圖4）。

       TE-1146是通過Immunwork High DAR平臺(tái)制備的，該平臺(tái)專為設(shè)計(jì)藥物抗體比（DAR）>4的均質(zhì)抗體偶聯(lián)藥物（ADC）而開發(fā)。該平臺(tái)采用兩項(xiàng)創(chuàng)新結(jié)構(gòu)：（1）通過計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)、含有半胱氨酸的鋅離子結(jié)合肽（ACPGHA），可延伸至單抗每條重鏈的C末端；（2）含馬來酰亞胺的多臂肽核心連接子，能結(jié)合三個(gè)藥物分子形成藥物簇。偶聯(lián)過程通過硫醇-馬來酰亞胺反應(yīng)，將兩個(gè)藥物簇連接至結(jié)構(gòu)優(yōu)化的單抗上。

       體外研究證實(shí)，TE-1146具有劑量依賴性細(xì)胞毒性：其對(duì)CD38陽性多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系H929和MM.1S的半效濃度（EC50）約為0.45 μM，而對(duì)CD38陰性的U266細(xì)胞無顯著作用。相比之下，即便濃度超過20 μM，達(dá)雷妥尤單抗單藥仍無法誘導(dǎo)細(xì)胞死亡--因其作用機(jī)制依賴于自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞發(fā)揮作用。來那度胺單藥或與達(dá)雷妥尤單抗以6:1摩爾比聯(lián)用時(shí)，在>10 μM濃度下僅顯示微弱細(xì)胞毒性，這可能與細(xì)胞攝取效率有限有關(guān)。TE-1146的效力較來那度胺單藥或其與達(dá)雷妥尤單抗聯(lián)用方案強(qiáng)100倍以上。

       在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，TE-1146在H929 NOD-SCID小鼠移植瘤模型中展現(xiàn)出顯著療效。單次給藥20 nmol/kg即可完全清除腫瘤，而同等劑量的達(dá)雷妥尤單抗僅能中度抑制腫瘤生長。達(dá)雷妥尤單抗與來那度胺聯(lián)用方案在前兩周可延緩腫瘤生長，但即便提高劑量（40或80 nmol/kg）也無法維持后續(xù)抑瘤效果。這些結(jié)果凸顯了TE-1146在體外和體內(nèi)模型中均具有卓越的抗腫瘤功效，這歸因于其能高效遞送并將來那度胺內(nèi)化至骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)，預(yù)示該藥物在多發(fā)性骨髓瘤治療中具有廣闊前景。

       5.4 c-MYC降解的MACs

       c-MYC是一種轉(zhuǎn)錄因子，它在超過一半的人類癌癥中頻繁過表達(dá)或激活，是一個(gè)極具吸引力但極具挑戰(zhàn)性的治療目標(biāo)。盡管c-MYC在致癌方面具有重要意義，但由于其固有的無序性、缺乏酶活性以及沒有明確的配體結(jié)合位點(diǎn)，開發(fā)針對(duì)c-MYC的有效小分子抑制劑一直受到阻礙，傳統(tǒng)上認(rèn)為它是'難以成藥。

       近日，蘇州開拓藥業(yè)/醫(yī)克生物通過設(shè)計(jì)新型分子膠降解劑取得重大突破，該系列化合物能引導(dǎo)c-MYC蛋白與E3泛素連接酶CRBN結(jié)合，最終實(shí)現(xiàn)c-MYC的降解。從結(jié)構(gòu)上看，這些沙利度胺類似物具有以下特征：(1) 保守的戊二酰亞胺環(huán)（負(fù)責(zé)與CRBN相互作用）；(2) 經(jīng)過修飾的鄰苯二甲酰環(huán)（可與c-MYC形成特異性結(jié)合界面）。通過醫(yī)克生物TMALIN平臺(tái)，優(yōu)選降解劑D-1、D-4和D-10經(jīng)可裂解三肽連接子與抗前列腺特異性膜抗原（PSMA）單抗偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)DAR為2（圖4）。PSMA作為ADC靶點(diǎn)具有顯著優(yōu)勢(shì)，因其不會(huì)脫落進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，且能在抗體結(jié)合后高效內(nèi)化。

       體外實(shí)驗(yàn)顯示，與未偶聯(lián)的降解劑（D-4、D-1和D-10）相比，偶聯(lián)分子MAC-001、MAC-002和MAC-003對(duì)PSMA陰性的人白血病HL60U細(xì)胞及正常外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）的抗增殖活性有所降低。然而，這些偶聯(lián)物在PSMA陽性的前列腺癌22RV1和VCap細(xì)胞中表現(xiàn)出顯著增強(qiáng)的細(xì)胞毒性，表明抗體偶聯(lián)可提高分子膠降解劑的選擇性殺傷效應(yīng)。

       研究人員進(jìn)一步在過表達(dá)PSMA的22RV1皮下移植瘤小鼠模型中評(píng)估了這些偶聯(lián)物的治療潛力。每周兩次靜脈注射MAC-002（劑量為5和10 mg/kg，持續(xù)21天）可顯著抑制腫瘤生長，抑制率分別達(dá)到31.8%和72%。這些令人鼓舞的結(jié)果凸顯了c-MYC降解型MAC藥物作為治療c-MYC驅(qū)動(dòng)型腫瘤的新型策略的應(yīng)用前景。

       5.5 樂高M(jìn)AC

       韓國LegoChem Biosciences公司近期公開了一種基于免疫調(diào)節(jié)藥物（IMiDs）化學(xué)骨架開發(fā)分子膠降解劑的新方法。這些分子膠降解劑通過與單抗偶聯(lián)，可生成DAR為2的均質(zhì)化、位點(diǎn)特異性MACs（圖4）。該偶聯(lián)過程采用LegoChem專有技術(shù)，包含四個(gè)關(guān)鍵步驟：（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒，用于表達(dá)在每條輕鏈C端含有半胱氨酸肽段（CVIM）的抗體；（2）通過在各輕鏈C端添加異戊二烯基團(tuán)實(shí)現(xiàn)抗體異戊烯化修飾；（3）采用帶有氨基氧基團(tuán)的β-葡萄糖醛酸連接子對(duì)分子膠化合物進(jìn)行修飾；（4）通過肟連接反應(yīng)實(shí)現(xiàn)抗體與連接子-載荷的位點(diǎn)特異性偶聯(lián)。

       體外實(shí)驗(yàn)分析表明，與未偶聯(lián)的分子膠降解劑相比，這些MACs展現(xiàn)出顯著增強(qiáng)的抗增殖活性。以HCC827細(xì)胞系為例，未偶聯(lián)分子膠的半數(shù)抑制濃度（IC50）為10.2 nM，而經(jīng)抗EGFR抗體偶聯(lián)的MACs的IC50達(dá)到0.09 nM，藥效提升了110倍。這些發(fā)現(xiàn)凸顯了MACs作為靶向癌癥治療強(qiáng)效策略的應(yīng)用潛力。

       5.6 Affibody-CR8偶聯(lián)物

       親和體（Affibodies）是一類小分子（6.5 kDa）非抗體單鏈蛋白支架，能夠特異性結(jié)合某些腫瘤過表達(dá)的受體。由于其結(jié)構(gòu)簡單，親和體易于修飾以實(shí)現(xiàn)有效載荷的偶聯(lián)。因此，部分親和體已被選作靶向載體，用于構(gòu)建親和體-藥物偶聯(lián)物（affibody-drug conjugate），實(shí)現(xiàn)靶向給藥。研究人員構(gòu)建了一種新型親和體-分子膠降解劑偶聯(lián)納米制劑，該制劑由以下組分構(gòu)成：(1) 經(jīng)修飾的抗HER2親和體（ZHER2:342-36FSY-Cys；FSY為氟磺酰-L-酪氨酸）；(2) 細(xì)胞周期蛋白K降解劑CR8；(3) 含二硫鍵的可裂解連接子（圖4）。該親和體-CR8偶聯(lián)物可在磷酸鹽緩沖液（PBS）中自組裝形成納米制劑。

       在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，由于親和體通過HER2內(nèi)吞作用介導(dǎo)的內(nèi)化效應(yīng)，親和體-CR8偶聯(lián)物展現(xiàn)出比游離CR8更強(qiáng)的細(xì)胞周期蛋白K降解能力。值得注意的是，游離CR8對(duì)所有測試癌細(xì)胞均具有強(qiáng)細(xì)胞毒性（IC50值在納摩爾范圍內(nèi)），而親和體-CR8偶聯(lián)物則表現(xiàn)出差異化的細(xì)胞毒性：其對(duì)HER2陽性SKOV-3細(xì)胞的IC50為338.20 nM，對(duì)HER2陰性MDA-MB-453細(xì)胞的IC50則高達(dá)1.98 μM。在安全性評(píng)估中，小鼠每3天通過尾靜脈注射接受CR8當(dāng)量劑量5 mg/kg的親和體-CR8偶聯(lián)物，30天內(nèi)未觀察到不良反應(yīng)。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重、血液學(xué)參數(shù)、肝腎功能及器官組織學(xué)均未見顯著變化，證實(shí)了該偶聯(lián)物良好的體內(nèi)安全性。

       6.分子膠穩(wěn)定劑-抗體結(jié)合物

       能夠以驚人效率促使兩種蛋白質(zhì)結(jié)合并產(chǎn)生功能效應(yīng)的小分子單價(jià)化合物被定義為分子膠。這類化合物不僅能降解靶蛋白，還可穩(wěn)定或破壞靶蛋白結(jié)構(gòu)。例如著名分子膠穩(wěn)定劑紫杉醇（Taxol?）可增強(qiáng)α-微管蛋白與β-微管蛋白的結(jié)合，從而阻止微管解聚并誘導(dǎo)有絲分裂停滯。

       盡管目前用作有效載荷的分子膠多為降解劑，但分子膠穩(wěn)定劑同樣具備載藥潛力。最新研究表明，基于穩(wěn)定劑的MACs為蛋白質(zhì)功能調(diào)控提供了新思路，進(jìn)一步拓展了MACs在癌癥治療等領(lǐng)域的應(yīng)用前景。

       6.1 磷酸抗原（pAg）-抗體結(jié)合物

       磷酸化抗原（pAgs）是細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的磷酸化中間體。在癌細(xì)胞中，代謝通路的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致pAgs的異常積累，從而增強(qiáng)這些細(xì)胞被γδ T細(xì)胞識(shí)別和清除的敏感性。最新研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)pAgs可作為分子膠穩(wěn)定劑發(fā)揮作用。例如，它們能促進(jìn)跨膜蛋白BTN3A1（嗜乳脂蛋白3A1）和BTN2A1（嗜乳脂蛋白2A1）的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域形成穩(wěn)定的異源二聚體。這種相互作用會(huì)進(jìn)一步促使二聚體的胞外結(jié)構(gòu)域與γδ T細(xì)胞受體結(jié)合，從而激活γδ T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向清除功能。

       Byondis BV公司最新開發(fā)了一系列以磷酸化抗原（pAgs）為有效載荷的MACs。這些pAg載荷通過可裂解連接子與多種靶向抗體偶聯(lián)，包括利妥昔單抗（抗CD20）、曲妥珠單抗（抗HER2）、抗CD123抗體及抗5T4抗體，DAR為2。以利妥昔單抗與連接子-pAg復(fù)合物XS58形成的MAC為例進(jìn)行評(píng)估（圖4）。在活性測試中，將CD20陽性的Raji細(xì)胞分別與裸利妥昔單抗或利妥昔單抗-XS58共孵育過夜后，再與含γδ T細(xì)胞的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）共培養(yǎng)6小時(shí)。結(jié)果顯示，經(jīng)利妥昔單抗-XS58預(yù)處理的Raji細(xì)胞能顯著提升γδ T細(xì)胞的干擾素（IFN）-γ和CD107a分泌水平，充分體現(xiàn)了基于pAg的MACs的強(qiáng)大免疫刺激效應(yīng)。該策略彰顯了pAg偶聯(lián)抗體在利用γδ T細(xì)胞免疫機(jī)制治療癌癥方面的巨大潛力。

       6.2 CD184-FK506

       由Ambrx公司研發(fā)的CD184-FK506是一種靶向CD184（又稱CXCR4）的新型治療性偶聯(lián)物。其有效載荷FK506是一種天然來源的免疫抑制劑，同時(shí)被鑒定為分子膠穩(wěn)定劑。從作用機(jī)制來看，F(xiàn)K506可與FK506結(jié)合蛋白12（FKBP12）結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物能協(xié)同緊密地結(jié)合鈣調(diào)磷酸酶（calcineurin），從而抑制其活性。FKBP12-FK506-鈣調(diào)磷酸酶三元復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)證實(shí)：單獨(dú)的FK506或FKBP12均無法以顯著親和力結(jié)合鈣調(diào)磷酸酶。Ambrx的技術(shù)方案是將FK506與CD184特異性靶向分子偶聯(lián)，但具體的連接子設(shè)計(jì)、偶聯(lián)位點(diǎn)及DAR值等細(xì)節(jié)尚未公開。

       7.總結(jié)和未來展望

       7.1挑戰(zhàn)

       分子膠作為治療藥物，其臨床應(yīng)用歷史遠(yuǎn)早于作用機(jī)制的闡明時(shí)間。近年來，用于癌癥治療的MACs研發(fā)取得重大進(jìn)展（表1）。通過將抗體的腫瘤靶向能力與具有新型作用機(jī)制的有效載荷相結(jié)合，MACs已成為藥物化學(xué)領(lǐng)域最 具前景的突破之一。目前，MACs已超越概念驗(yàn)證階段，其中兩個(gè)候選藥物（ORM-5029和ORM-6151）正處于I期臨床試驗(yàn)階段。值得注意的是，與靶向相同抗原的現(xiàn)有ADC藥物相比，二者均展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：具體而言，ORM-5029在T-DM1耐藥和HER2低表達(dá)的移植瘤模型中均表現(xiàn)出強(qiáng)效抗腫瘤活性，從而突破了當(dāng)前HER2靶向ADC藥物的關(guān)鍵局限；而ORM-6151相較于Mylotarg（吉妥珠單抗奧唑米星），對(duì)CD33陽性細(xì)胞展現(xiàn)出更高的選擇性，有望提供更優(yōu)的臨床安全性和更寬的治療窗。

       表1.本文中分子膠-抗體結(jié)合物的總結(jié)

       備注：黃色橢圓處為分子膠化學(xué)結(jié)構(gòu)中的連接位點(diǎn)

       分子膠降解劑領(lǐng)域目前正處于快速發(fā)展階段，不僅靶向多種癌癥，還涉及非腫瘤性疾病領(lǐng)域，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病和血液系統(tǒng)疾病等。鑒于搭載非化療類有效載荷的ADC藥物已在炎癥性疾病、免疫紊亂、視網(wǎng)膜病變及細(xì)菌感染等領(lǐng)域展現(xiàn)出治療潛力，預(yù)計(jì)MACs通過采用非腫瘤靶向的分子膠降解劑，同樣有望拓展其治療范圍。

       盡管MACs前景廣闊，但其開發(fā)仍面臨諸多挑戰(zhàn)。首要限制在于分子膠降解劑的稀缺性--這類化合物歷史上多通過偶然發(fā)現(xiàn)獲得。由于需要獨(dú)特地重塑蛋白質(zhì)表面結(jié)構(gòu)并與兩種蛋白形成三元復(fù)合物，分子膠的理性設(shè)計(jì)本身極具挑戰(zhàn)性。此外，作為MACs的有效載荷，分子膠必須滿足嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)：既需具備可供化學(xué)修飾的活性基團(tuán)，又需確保修飾不影響其生物功能。這些限制條件大幅縮小了候選分子的選擇范圍。

       更重要的是，MACs作為多組分復(fù)合體系，其藥物抗體比、連接子穩(wěn)定性和偶聯(lián)方法等參數(shù)都會(huì)顯著影響藥效與毒性。另一個(gè)關(guān)鍵考量是：分子膠會(huì)永久性降解靶蛋白，雖然這種作用機(jī)制可能非常有效，但也帶來風(fēng)險(xiǎn)--一旦出現(xiàn)副作用將難以逆轉(zhuǎn)。鑒于傳統(tǒng)ADCs和分子膠均已出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，MACs也可能面臨類似挑戰(zhàn)。由于MACs通過雙重靶向并調(diào)控多個(gè)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)程發(fā)揮作用，其耐藥機(jī)制可能包括：靶抗原或新底物的下調(diào)、溶酶體蛋白水解活性受損、藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白上調(diào)，以及E3連接酶表達(dá)異常等多種途徑。

       7.2 未來展望

       近年來，結(jié)構(gòu)生物學(xué)、人工智能（AI）與機(jī)器學(xué)習(xí)（ML）的融合徹底改變了分子膠及其偶聯(lián)物的開發(fā)模式（圖5）。在靶點(diǎn)識(shí)別階段，AlphaFold2可實(shí)現(xiàn)全蛋白質(zhì)組范圍內(nèi)易降解蛋白的預(yù)測。幾何深度學(xué)習(xí)等先進(jìn)ML方法能精準(zhǔn)預(yù)測三維蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)及蛋白-配體相互作用，這對(duì)理解分子膠介導(dǎo)的靶標(biāo)結(jié)合機(jī)制至關(guān)重要。此外，生成式AI已助力構(gòu)建分子膠化合物庫，基于ML的定量結(jié)構(gòu)-性質(zhì)關(guān)系（QSPR）模型則可預(yù)測靶向蛋白降解（TPD）化合物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）特性。這些方法的整合實(shí)現(xiàn)了降解劑分子的系統(tǒng)化設(shè)計(jì)與優(yōu)化。展望未來，AI推理模型或能全面分析抗體與分子膠的靶點(diǎn)及組織選擇性，從而預(yù)測MACs的最佳組合方案與適應(yīng)癥。雖然此類模型尚未完全實(shí)現(xiàn)，但其開發(fā)至關(guān)重要，未來還可拓展至AI輔助的ADC設(shè)計(jì)領(lǐng)域。

       圖5.分子膠-抗體結(jié)合物（MACs）的人工智能（AI）/機(jī)器學(xué)習(xí)（ML）驅(qū)動(dòng)開發(fā)路線圖。主要階段包括：(1)利用AlphaFold預(yù)測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，以識(shí)別新的易降解目標(biāo)。(2)通過幾何深度學(xué)習(xí)進(jìn)行復(fù)雜預(yù)測，結(jié)合基于擴(kuò)散的生成式AI設(shè)計(jì)降解劑，采用降解效力評(píng)分和定量結(jié)構(gòu)-性質(zhì)關(guān)系（QSPR）模型來預(yù)測吸收、分布、代謝和排泄（ADME）特性。(3)通過MAC設(shè)計(jì)和優(yōu)化，確定分子膠、連接子和抗體的最佳組合。AI/ML平臺(tái)通過全面分析目標(biāo)和組織的選擇性，預(yù)測合適的臨床應(yīng)用，并確定最佳的分子膠-連接子-抗體組合。