上篇回顧：《基于流感發(fā)病機制的藥物研發(fā)現(xiàn)狀（上篇）》

       抑制流感病毒 RNA 聚合酶的藥物

       流感病毒 RNA聚合酶是由PA、PB1 和 PB2亞基構(gòu)成的蛋白質(zhì)復(fù)合物，PA具有內(nèi)切核酸酶活性并可誘導(dǎo)蛋白水解，PB1具有RNA 聚合活性，PB2可識別并結(jié)合宿主5＇mRNA 帽結(jié)構(gòu)在基因組復(fù)制轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮重要作用。當(dāng)前臨床上RNA聚合酶抑制劑突變頻率低且不良反應(yīng)輕，已成為抗流感藥物研究的重要靶標(biāo)。

       1、化藥及小分子化合物

       鳥苷核糖核苷類似物利巴韋林主要靶標(biāo)為肌苷5＇-單磷酸脫氫酶( inosine monophosphate dehydrogenase，IMPDH)，可通過降低細(xì)胞內(nèi)GTP 濃度和阻止病毒蛋白質(zhì)合成來抑制病毒 RNA 復(fù)制且可引起 RNA 復(fù)制突變，與甘草酸聯(lián)用可顯著降低炎癥因子IL-6、TNF-α 和 IL-1β 的表達水平。已進入Ⅲ期臨床試驗的匹莫地韋靶向 RNA 聚合酶的 PB2 亞基并通過阻止聚合酶結(jié)合以及宿主前體 mRNA 上的7-甲基GTP 帽結(jié)構(gòu)，從而抑制病毒基因的表達，對多種甲型流感病毒及 NAIs 敏感性低的毒株具有活性。當(dāng)前已在美國和日本上市的巴洛沙韋靶向病毒 PA亞基的核酸內(nèi)切酶活性，一旦它被 PB2.8 結(jié)合就可以阻止聚合酶切割前體mRNA，對甲、乙型流感病毒甚至耐奧司他韋的病毒均有效。嘌呤核苷類似物法匹拉韋幾乎對所有流感病毒均具有活性，其在細(xì)胞內(nèi)被核糖基化和磷酸化后形成藥物活性形式核苷三磷酸化物法匹拉韋 RTP，這種形式被病毒 RNA聚合酶錯誤識別作為嘌呤誤摻入新生 RNA 中并在 RNA 合成過程中導(dǎo)致鏈終止，此外還通過誘發(fā)致命性的突變來發(fā)揮抗病毒作用，由于新冠肺炎疫情等原因該藥已在我國上市。

       2、中藥活性成分

       異槲皮苷可阻斷RNA 聚合酶中PB2運作來阻止病毒復(fù)制，還能減少甲流感染產(chǎn)生的活性甲氧基。水飛薊種子中提取的水飛薊素主要成分水飛薊賓、水飛薊寧等可阻止病毒進入宿主細(xì)胞并調(diào)節(jié)自噬抑制氧化應(yīng)激物的形成，還可觸發(fā)細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶 (extracellular signal regulated kinase，ERK) /p38 絲裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinase，MAPK) 和IκB激酶( inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase，IKK) 級聯(lián)。川楝子的主要活性成分川楝素與 PA 的結(jié)合親和力強于已知 PA抑制劑的結(jié)合親和力，其通過改變 PA 蛋白的核定位破壞核轉(zhuǎn)運導(dǎo)致 PA的胞質(zhì)積累并抑制流感病毒mRNA 早期復(fù)制，還通過抑制蛋白激酶 B 活性來干擾病毒進入宿主細(xì)胞。

       緩解機體免疫過度的藥物

       抗炎免疫是機體對抗流感病毒侵襲必不可少的一步，炎癥因子作為免疫的信號分子通過 NF-κB、Nrf2、JAK-STAT、RLRs、AMPK 等信號通路釋放進行機體自我防衛(wèi)。除了抑制流感病毒復(fù)制和擴散，還應(yīng)阻斷炎癥因子在免疫細(xì)胞間傳遞引起的人體過度免疫。

       1、化藥及小分子化合物

       靜脈免疫球蛋白( intravenous immunoglobulin，IVIG) 含有 IgG 抗體，具有免疫替代和免疫調(diào)節(jié)雙重治療效果，可降低重癥流感相關(guān)的死亡率和發(fā)病率，在流感重癥監(jiān)護環(huán)境中常作為第一階段干預(yù)措施。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferators-activated receptors γ，PPARγ) 具有增強脂質(zhì)和葡萄糖的代謝以及細(xì)胞分化和抑制炎癥等功能，在機體免疫過度時可減少嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量并減少炎癥因子的產(chǎn)生。N-乙酰半胱氨酸可抑制髓過氧化物酶活性，減少嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)量及促炎因子水平來減少肺部炎癥和肺水腫。

       2、中藥活性成分、復(fù)方及中成藥

       瓜子金皂苷可有效降低肺組織中 IL-1β、TNF-α、IL-4、IFN-γ、TXA2 和 PGE2 的水平，通過減輕肺部炎癥反應(yīng)來增強抗甲流感染的能力。穿心蓮內(nèi)酯被譽為天然抗生素藥物，其抗流感病毒活性是通過參與 NF-κB、Nrf2、JAK-STAT 和 RLRs 信號通路的激活降低病毒載量和感染引起的炎性細(xì)胞因子表達并最終減少流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，此外由穿心蓮內(nèi)酯作為主要成分的喜炎平注射液聯(lián)合奧司他韋用藥普遍具有良好的臨床療效。中藥甘草活性成分包括甘草甜素、甘草次酸和異甘草素等，甘草甜素在 IL-1信號通路中作用于皮質(zhì)類固醇11-β-脫氫酶同工酶1進入宿主細(xì)胞，阻礙單核細(xì)胞募集并降低促炎分子 ( CXCL10、IL-6、CCL2 和CCL5) 水平，激活I(lǐng)FN-γ并降低NF-κBp38 和JNK的表達，具有抗氧化活性，可抑制流感病毒誘導(dǎo)的活性氧( ROS) 形成，此外還可以用作制備抗流感**的佐劑；異甘草素在PPAR 途徑的激活下抑制炎癥因子基因表達和炎癥細(xì)胞聚集來緩解肺部炎癥。經(jīng)典名方葛根湯通過促進IL-12及IFN-γ的產(chǎn)生來誘導(dǎo)Th1系統(tǒng)免疫應(yīng)答，降低 Toll 樣受體7( Toll like receptor 7，TLR-7) 信號通路和TNF-α 的表達并改善 Th1 /Th2 免疫平衡從而減輕過度免疫反應(yīng)。參附注射液通過抑制高遷移率族蛋白B1 ( high mobility group protein B1，HMGB1) 的轉(zhuǎn)錄、表達、易位和分泌，增加TLR-4 信號的表達和 IκB-α 產(chǎn)生的同時降低肺中p65、p50、TNF-α 和 IL-1β 的表達水平從而有效預(yù)防 MAP的下降并減輕肺組織損傷，即通過抑制 HMGB1-NF-κB 途徑預(yù)防炎癥因子風(fēng)暴發(fā)生。

       多靶點抗流感的藥物

       部分抗流感藥物通過多成分、多靶點和多通路作用，達到抑制流感病毒復(fù)制和抗炎免疫的雙重藥效作用，當(dāng)前此類藥物多集中在一些待開發(fā)的中藥活性成分。

       1、化藥及小分子化合物

       鹽霉素是甲、乙型流感病毒有效的殺傷劑，通過阻斷NP的核遷移在病毒進入過程中特別是在核周內(nèi)體中引起 NP 的胞質(zhì)積累，還可阻止內(nèi)體酸化并失活M2 質(zhì)子轉(zhuǎn)運功能，此外與奧司他韋聯(lián)用能顯著提高療效，可用于輔助治療對現(xiàn)有藥物耐藥或敏感性較低的流感。硝唑尼特是一類口服抗寄生蟲藥但同時具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用， 通過抑制 HA 的成熟與翻譯進一步靶向流感病毒并上調(diào)IFN和各種IFN誘導(dǎo)型基因發(fā)揮抗炎作用，與奧司他韋組合也具有協(xié)同增效的作用。

       2、中藥活性成分及中成藥

       兒茶素類化合物在流感病毒結(jié)構(gòu)保守的鄰近殘基430空腔附近 (次唾液酸結(jié)合位點)與NA 結(jié)合抑制病毒脫離，還以劑量依賴性方式顯著降低自噬相關(guān)蛋白LC3B 的含量并通過影響 HA的構(gòu)象發(fā)揮抗流感病毒的作用，天然兒茶素甚至可以用作制備滅活病毒**的滅活劑。

       多酚類物質(zhì)姜黃素干擾 HA 與宿主細(xì)胞受體結(jié)合且其衍生物與 HA 所有亞型都具有顯著的結(jié)合親和力，還通過中斷 Y148 和 RNA 堿基之間的堆疊作用降低 NP 的RNA 結(jié)合親和力，可明顯抑制流感病毒誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激并通過激活 Nrf2 信號抑制流感病毒誘導(dǎo)的TLR2/4，NF-κBp38 /JNK和MAPK信號的激活。

       蘆薈蒽醌類成分蘆薈苷通過抑制流感病毒NA 并阻止NA介導(dǎo)的TGF-β的活化來抑制由TGF-β介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，提高病毒HA特異性T細(xì)胞的免疫力，使得肺中HA特異Th 和Tc 有更多的浸潤并恢復(fù)NS1抑制的STAT1介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的抗病毒應(yīng)答且增強了IFN-γ 和TNF-α的產(chǎn)生，其黃酮類成分槲皮素、兒茶素和山 奈酚等可顯著抑制病毒 mRNA中M2的相關(guān)節(jié)段合成并通過與關(guān)鍵功能位點( PHE47A 和LEU43A) 的結(jié)合來抑制 M2 蛋白的表達，此外還通過抑制流感病毒誘導(dǎo)的自噬對H1N1 或H3N2 產(chǎn)生抗病毒活性，蘆薈多糖通過活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO并分泌細(xì)胞因子( TNF-α、IL-6 和IFN-γ) 來介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用，同時也有抑制 M2 的作用。

       黃芩的黃酮提取物包括黃芩素、漢黃芩素、木蝴蝶素及糖苷類等，黃芩苷可阻止H3N2 抑制的 mTOR 信號傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)的自噬，還可誘導(dǎo)Th、Tc 和NK細(xì)胞中的 IFN-γ 產(chǎn)生并激活 JAK-STAT1 信號通路，漢黃芩素可抑制流感誘導(dǎo)的AMPK 磷酸化和激活，在I型和Ⅲ型IFN的誘導(dǎo)下通過 IRF3的磷酸化和 IL 刺激基因(如MxA 和OAS) 的激活來增強抗病毒信號傳導(dǎo)進而減輕炎癥反應(yīng)；黃芩的黃酮提取物不僅能抑制HA、NA 活性，降低TNF-α、IL-6 和MCP-1的表達并增加肺組織中IFN-γ 和 IL-10 的表達水平調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，還能通過影響腸道菌群間接幫助身體恢復(fù)，在甲流誘導(dǎo)的肺損傷治療中提取物比單一的黃芩素有更佳的治療效果。

       體外實驗發(fā)現(xiàn)板藍根水提物 S-03 具有抑制HA和增加抗氧化酶活性的作用，例如SOD，CAT，GSH-Px 和總抗氧化能力；板藍根多糖提取物通過激活TLR-3信號通路削弱流感病毒誘導(dǎo)的促炎因子的上調(diào)并顯著降低 IL-6，IP-10，MIG 和 CCL5的表達，對人流感病毒( H1N1 和 H3N2) 和禽流感病毒( H6N2和H9N2) 具有抑制作用。

       流感是人類生存面臨的一個巨大威脅，由于優(yōu)先使用NA抑制劑的治療策略，現(xiàn)面臨著層出不窮的耐藥株，部分藥物還具有嚴(yán)重的毒副作用如金剛烷胺類中樞神經(jīng)系統(tǒng)**，在耐藥株層出不窮的狀況下許多有療效的化合物還停留在篩查試驗階段，相關(guān)藥物的臨床試驗及上市還需要很長一段時間。中藥的多靶點作用機制尚不明確，很多藥物僅是體外實驗有效果，體內(nèi)作用機制未知且用于流感治療時依靠的只是長年累月的用藥經(jīng)驗，部分中藥成分還存在溶解性差、穩(wěn)定性差、生物利用度低等問題。當(dāng)前抗病毒 藥物研究主要有兩個方面，一是針對現(xiàn)有靶標(biāo)來優(yōu)化或設(shè)計新的藥物；二是尋找新的靶標(biāo)，開發(fā)新的抗病毒 藥物。

       參考資料

       陳金鳳,何軍,徐濤.基于流感發(fā)病機制的藥物研究進展[J].中國藥理學(xué)通報,2021,37(05):606-612.

       作者簡介：

       小米蟲，藥品質(zhì)量研究工作者，長期致力于藥品質(zhì)量研究及藥品分析方法驗證工作，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，從事藥品檢驗分析及分析方法驗證