靶向藥物輸送能改變抗血栓藥物療效和不良反應(yīng)之間的平衡，以克服抗血栓治療的局限性。近年來，基于納米技術(shù)的藥物遞送系統(tǒng)已被廣泛研究，以實現(xiàn)靶向抗血栓治療。納米技術(shù)可通過增加藥物靶向性實現(xiàn)更加高效低毒的治療，在醫(yī)藥領(lǐng)域已經(jīng)備受關(guān)。目前，血栓診療中的生物仿生型納米靶向策略主要包括血小板靶向策略、仿生紅細胞策略和纖維蛋白靶向策略。

       血小板靶向策略

       血栓形成是一個復(fù)雜的動態(tài)過程，但無論是動脈血栓還是靜脈血栓，都涉及兩個關(guān)鍵步驟：①血小板黏附，即血小板通過P-選擇素等受體分子，在血管內(nèi)膜損傷處黏附、沉積；②血小板聚集，即活化血小板高表達具有血栓特異性的糖蛋白（glycoprotein，GP）Ⅱb/Ⅲa，與纖維蛋白結(jié)合，聚集成團并促進血小板聚集。

       1、P-選擇素

       P-選擇素是一種鈣依賴性凝集素，可通過調(diào)節(jié)中性粒細胞和單核細胞活性促進并增強血栓形成，其主要配體是 P-選擇素糖蛋白配體-1（P-selectin glycoprotein ligand 1，PSGL-1）。巖藻多糖（fucoidan，F(xiàn)u）是一種含有巖藻糖和硫酸基團的多糖，可通過模仿PSGL-1對P-選擇素表現(xiàn)出高度親和力。同時，F(xiàn)u 具有與肝素相似的結(jié)構(gòu)，可表現(xiàn)出類似肝素的抗凝生物活性，但出血風(fēng)險比肝素低得多。因此，F(xiàn)u 有望作為血栓診斷和治療的納米顆粒（NPs）。研究證明，F(xiàn)u功能化的 NPs 可用于內(nèi)皮活化和腔內(nèi)血栓形成的診斷。利用Fu與溶栓藥物重組組織型纖溶酶原激活劑（recombinant tissue-typeplasminogen activator，rt-PA）結(jié)合制備的NPs 制劑能提高rt-PA 的效率。將尿激酶（urokinase，UK）加載到介孔二氧化硅包覆的金納米棒孔中，并使其吸附吲哚菁綠和 Fu，其能靶向血栓部位快速釋放UK以清除血栓，并緩慢釋放Fu 預(yù)防血栓再生。

       2、GP Ⅱb/Ⅲa

       血小板黏附在血管損傷部位后隨即產(chǎn)生形狀變化，釋放顆粒并聚集成群，這一過程伴隨著纖維蛋白原與活化血小板膜上的糖蛋白GP Ⅱb/Ⅲa結(jié)合。GP Ⅱb/Ⅲa是介導(dǎo)血小板聚集的主要受體，也是血小板表面表達最豐富的受體。在血小板活化后，GPⅡb/Ⅲa 受體對其配體纖維蛋白原/纖維蛋白經(jīng)歷從低親和力到高親和力的構(gòu)象變化。已有研究通過使用精氨酸-甘氨酸-天門氨酸（arginine-glycine-aspartic，RGD）類似物模擬 GPⅡb/Ⅲa 天然配體纖維蛋白原的結(jié)合表位，對血栓進行分子成像，如超聲、MRI、正電子發(fā)射計算機斷層顯像等。為防止溶栓藥物的脫靶效應(yīng)，有研究利用脂質(zhì)體對鏈激酶進行封裝，并在脂質(zhì)體外修飾了RGD，開發(fā)出類似血小板微粒的納米囊泡，體外實驗證明可通過與活化血小板上的整合素 GPⅡb/Ⅲa 的結(jié)合主動錨定到富含血小板的血栓上，即使是在高剪切力條件下也能實現(xiàn)較長時間的藥物滯留；而體內(nèi)實驗則證實，與未修飾的囊泡相比，修飾 RGD 的囊泡能更好地結(jié)合并積聚在血栓上。有學(xué)者首先合成含有類卟啉金屬中心（porphyrinlike metal centers，PMCS）的介孔碳納米球，其后在外表偶聯(lián) RGD，電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測證實，RGD-PMCS 與活化血小板的結(jié)合率顯著高于PMCS；在大鼠下肢動脈血栓模型中，RGD-PMCS 在血栓部位的積聚速度遠快于 PMCS，表明 RGD-PMCS 具有縮短溶栓治療時間的巨大潛力。

       3、血小板膜包被

       血小板膜包裹的納米載體有望延長藥物體內(nèi)循環(huán)時間，并有效地靶向血栓部位。研究報道有學(xué)者開發(fā)了血小板膜包裹的聚合物納米粒(納米血小板) ，用于將組織型纖溶酶原激活劑（rt-PA）靶向遞送至血栓部位以實現(xiàn)溶栓治療。其中，血小板膜是從小鼠全血中所提取，將其與聚乳酸-羥基乙酸共聚物( Poly( Lactic-co-Glycolic Acid)，PLGA)內(nèi)核表面相結(jié)合，并通過馬來酰亞胺連接劑將溶栓藥物rt-PA 與血小板膜外的活化巰基進行化學(xué)連接，形成 PNP-PA納米血小板。將其靜脈注射到幾種不同的動物血栓模型(包括腸系膜動脈栓塞、肺栓塞和缺血性中風(fēng)模型) 中時，PNP-PA 表現(xiàn)出強大的天然靶向性和局部血栓降解，表明該制劑在血栓相關(guān)疾病中的治療潛力。同時，安全性評估的結(jié)果表明，PNP-PA顯示出比游離 rt-PA 更低的出血風(fēng)險。此外，還有學(xué)者設(shè)計了血小板膜包裹 PLGA核心負載蚓激酶 ( lumbrukinase，LBK) 的納米粒 ( PNPs /LBK) 用于高效溶栓。研究人員構(gòu)建了小鼠頸動脈血栓模型證實血小板膜包裹的納米粒對血栓的良好親和力。此外，與游離 LBK 相比，PNPs /LBK在低劑量下能夠表現(xiàn)出理想的溶栓效果。而且PNPs /LBK對凝血系統(tǒng)功能的不良影響較小，從而使出血風(fēng)險大幅度降低。

       仿生紅細胞策略

       作為血液中最豐富的細胞，紅細胞( red blood cell，RBC) 具有良好的生物相容性、生物可降解性和非免疫原性。由于其表面的蛋白質(zhì)組成，RBC 在生理環(huán)境中表現(xiàn)出血液長循環(huán)的行為。然而，傳統(tǒng)的化學(xué)或生物方法無法模擬復(fù)雜的膜結(jié)構(gòu)和生理特性。將仿生表面特性賦予納米粒是一種極具前景的新方法，其具體策略可以分為兩種：①將仿生RBC設(shè)計成納米載體；②使用分離的紅細胞膜對納米粒進行包被。

       利用仿生RBC 與RBC 相似的形狀和特性，將其設(shè)計成納米載體，有望實現(xiàn)高效的藥物遞送和優(yōu)異的血栓治療。研究報道，利用PLGA和聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG) 的混合物模擬RBC 結(jié)構(gòu)，將溶栓劑rt-PA與PLGA 鏈中的羧基共價連接形成柔軟的盤狀納米結(jié)構(gòu)( rt-PA-DPN)。實驗結(jié)果表明，DPN 的多孔基質(zhì)能夠保護rt-PA 免受降解，使 rt-PA-DPN 在暴露于血清蛋白3小時后仍能成功保持 rt-PA 總活性的70%。同時，rt-PADPN 的可變形性使其能夠穿過肺部和脾實質(zhì)中最小的毛細血管，從而支持其在體內(nèi)循環(huán)數(shù)天。藥效實驗表明，rt-PA 活性的維持、DPN 的變形以及血液長循環(huán)的共同作用，使得 rt-PA-DPN 的溶栓效果顯著增強，故該納米粒有望成為一種提高溶栓治療效力和安全性的重要平臺。rt-PA 紅細胞由于體積較大，不能滲透以及牢固附著在成熟血塊上，但是它們能夠有效損害新血塊的形成，因此被建議用于血栓預(yù)防而非急性治療。

       紅細胞膜包被的仿生納米粒同樣在藥物遞送中發(fā)揮著巨大的優(yōu)勢。有學(xué)者制備了一種由肝素( heparin，Hep) 和殼聚糖( chitosan，CHI) 組成的“雙面人”( Janus) 型納米馬達( JPMs)，并使用紅細胞膜對JPMs 進行修飾( EM-JPMs)。由于相反表面電荷的作用，兩種天然聚合物可以逐層自組裝形成膠囊。其中，Hep 不僅是膠囊的結(jié)構(gòu)成分，而且還具有預(yù)防和溶解血栓形成的生物學(xué)功能。紅細胞膜的包被大大延長了此納米粒在體內(nèi)的循環(huán)時間，有利于更好地發(fā)揮藥效。此外，為了確保納米馬達的運動，膠囊部分覆蓋有金殼，能夠利用近紅外輻射通過光熱效應(yīng)實現(xiàn)其運動。同樣，近紅外輻射也具有雙重功能，它不僅可以支持運動，還可以用于血栓的光熱消融。實驗表明，具有以上特性的 JPM 為溶栓治療提供了一個安全有效的平臺。

       纖維蛋白靶向策略

       血栓主要由大量的纖維蛋白、紅細胞、血小板，以及少量的白細胞和膽固醇晶體構(gòu)成。纖維蛋白是一種重要的細胞外基質(zhì)蛋白，在血栓形成過程中為血栓提供骨架。纖維蛋白特異性抗體曾被用于纖維蛋白靶向，但現(xiàn)在已開發(fā)出多種免疫原性較低、成本較低的纖維蛋白結(jié)合肽。其中，具有代表性的是五肽半胱氨酸-精氨酸-谷氨酸-賴氨酸-丙氨酸 （Cys-Arg-Glu-LysAla，CREKA），其對沉積的纖維蛋白凝塊具有極高的親和力。

       研究報道設(shè)計了一種連接有纖維蛋白靶向肽CREKA的葡聚糖-替羅非班納米粒( T-RBC-DTC NPs)，通過CREKA的連接，能夠?qū)崿F(xiàn)高效的血栓歸巢。同時，苯硼酸酯鍵的連接有助于該納米連接體在血栓的氧化環(huán)境下選擇性釋放，從而實現(xiàn)替羅非班的快速靶向釋藥。在頸動脈血栓模型中，該納米粒展現(xiàn)出了卓越的溶栓作用和良好的生物安全性。還有學(xué)者設(shè)計了一種既有溶栓活性又有活性氧清除能力的二氧化錳納米酶，并在其外表修飾CREKA肽， 將該產(chǎn)物加入涂有纖維蛋白原的組織培養(yǎng)簇孔中后發(fā)現(xiàn)，與不含 CREKA 基序的納米酶相比，帶有 CREKA 基序的納米酶保留在孔中的數(shù)量明顯增加；在小鼠大腦中動脈閉塞模型中，閉塞腦血管內(nèi)的纖維蛋白明顯增多，帶有 CREKA 基序的納米酶顯示出與纖維蛋白明顯的共定位，表明該納米酶對富含纖維蛋白的血栓具有特異性。

       納米仿生遞藥系統(tǒng)的發(fā)展有益于維持藥物在體內(nèi)的活性、實現(xiàn)藥物在血栓部位的靶向聚集、以增強藥物在血栓組織的擴散滲透。此技術(shù)對于臨床轉(zhuǎn)化時的高效溶栓和出血風(fēng)險的最小化有著重要的指導(dǎo)意義。

       參考資料

       [1]張洪源,孫勝男,王晨,等.新型納米藥物遞送系統(tǒng)用于血栓診療的研究進展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2022,39(06):760-772.

       [2]許謹嬿,袁良喜.納米材料在血栓疾病治療中的應(yīng)用進展[J].中國血管外科雜志(電子版),2023,15(04):380-384.