引言：
2025中國藥典對《9101 分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》進(jìn)行了重大修改，進(jìn)一步推進(jìn)了統(tǒng)計(jì)學(xué)在分析方法驗(yàn)證中的應(yīng)用。如何運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證數(shù)據(jù)的報(bào)告成為分析工作者亟待解決的難題。
本文將對方法學(xué)驗(yàn)證中的兩大關(guān)鍵性能指標(biāo)"準(zhǔn)確度和精密度"的數(shù)據(jù)報(bào)告要求進(jìn)行解讀，并詳細(xì)的講述如何運(yùn)用傳統(tǒng)的excel軟件對驗(yàn)證數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，旨在幫助業(yè)界同仁盡快將法規(guī)要求落地實(shí)施。
1. 準(zhǔn)確度和精密度的單獨(dú)評價(jià)
2025藥典要求：所有的精密度試驗(yàn)都應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和適當(dāng)?shù)?00（1－α）%置信區(qū)間或其他合理的統(tǒng)計(jì)區(qū)間。準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)報(bào)告為在試樣中已知添加量分析物的平均回收率，同時(shí)提供合理的100（1－α）%置信區(qū)間。
1.1 標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差
標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均用于描述測試結(jié)果之間的離散程度，計(jì)算公式如下：
1.2 α如何取值
α表示顯著性水平，用來衡量在假設(shè)檢驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能出現(xiàn)錯(cuò)誤的概率。α越小，則出錯(cuò)的概率越小。通常α取0.05，因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)學(xué)上認(rèn)為，如果一件事情的發(fā)生概率只有5%，那么就不太可能發(fā)生。
置信水平=100（1-α）%，當(dāng)α取0.05時(shí)，置信水平為95%，即：有95%的信心認(rèn)為真實(shí)的參數(shù)值位于計(jì)算出的置信區(qū)間內(nèi)。
1.3 置信區(qū)間如何計(jì)算
置信區(qū)間由置信下限 (CL) 和置信上限 (CU)組成，表示總體參數(shù)在一定的置信水平下可能出現(xiàn)的范圍為[CL,CU]。
在分析方法驗(yàn)證中，重復(fù)性的樣本量通常為1×6，準(zhǔn)確度的樣本量通常為3×3或1×6，均屬于小樣本數(shù)據(jù)（n＜20），宜采用t分布計(jì)算置信區(qū)間。公式如下：
式中：df表示自由度n-1；
t1-α/2，df是自由度為df且置信水平為1-α時(shí)的t分布的1-α/2分位數(shù)。采用excel計(jì)算時(shí)，函數(shù)為TINV（α，df）。
√n采用excel計(jì)算時(shí)，函數(shù)為SQRT（n）。
1.4 數(shù)據(jù)報(bào)告示例
表1.4.1 重復(fù)性結(jié)果（示例）
表1.4.2 準(zhǔn)確度結(jié)果（示例）
2. 準(zhǔn)確度和精密度的聯(lián)合評價(jià)
2025藥典提出：準(zhǔn)確度和精密度可以聯(lián)合評價(jià)，統(tǒng)計(jì)方法可采用預(yù)測區(qū)間、容忍區(qū)間或置信區(qū)間，也可采用其他合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。
從上表可以看出，準(zhǔn)確度和精密度的聯(lián)合評價(jià)，本質(zhì)都是通過對樣品進(jìn)行多次測定，計(jì)算出結(jié)果可能出現(xiàn)的范圍，當(dāng)此范圍可接受時(shí)，即可認(rèn)為方法準(zhǔn)確。因此，準(zhǔn)確度和精密度聯(lián)合評價(jià)的前提是：已獲得樣品的真值或可接受的參比值。
聯(lián)合評價(jià)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：①對于含量測定方法，原料藥可用已知純度的對照品或供試品進(jìn)行多次測定；制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物對照品進(jìn)行多次測定。②對于雜質(zhì)測定方法，可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)對照品進(jìn)多次行測定。
細(xì)心的讀者會(huì)發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合評價(jià)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路與單獨(dú)的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)一致，只是結(jié)果判定的計(jì)算方式不同，且省略了精密度實(shí)驗(yàn)！??！因?yàn)榫懿灰欢?zhǔn)確，但準(zhǔn)確一定精密，聯(lián)合評價(jià)通過充分的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)同時(shí)表征方法的準(zhǔn)確度和精密度。為了保證"聯(lián)合評價(jià)"的可靠性，樣本量至少≥10。
數(shù)據(jù)示例：對某一原料藥的含量測定方法進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度的聯(lián)合驗(yàn)證。取已知純度為99.8%的對照品，按照供試品溶液的配制方法，平行配制10份。
從上述統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看到，三種不同的統(tǒng)計(jì)方式所得到的區(qū)間范圍大不相同。2025藥典提出：一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法不一定適用于所有情況。如不適用，其他統(tǒng)計(jì)學(xué)方法可用于方法驗(yàn)證結(jié)果的評價(jià)。那么，實(shí)際運(yùn)用過程中，到底以哪一種統(tǒng)計(jì)方式為準(zhǔn)呢？
筆者認(rèn)為：基于統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析方法學(xué)驗(yàn)證，本質(zhì)是通過驗(yàn)證表征方法的總體性能，并以此預(yù)測未來質(zhì)量控制時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)。這種方式更為科學(xué)，卻對分析方法驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)樣本提出更高的要求，因?yàn)?span style="color: #0000ff;">統(tǒng)計(jì)結(jié)果的可靠性與樣本量的大小密切相關(guān)，過小的樣本量可能導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)區(qū)間過寬，從而失去實(shí)際決策意義，但足夠的樣本量需要企業(yè)付出更高的實(shí)驗(yàn)成本。通常驗(yàn)證的樣本量＜20，綜合考量統(tǒng)計(jì)方式對樣本量的敏感性，建議優(yōu)先選擇"預(yù)測區(qū)間"，其次選擇"置信區(qū)間"。
注：筆者水平有限，不足之處在所難免，請各位老師批評指正。
參考文獻(xiàn)：
【1】《9101 分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》
【2】《9097分析數(shù)據(jù)的解釋與處理指導(dǎo)原則》
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